Das Humboldthaus beherbergt den großen Vortragsaal des Senckenberg Museums für Naturkunde Görlitz mit 180 Sitzplätzen. Er liegt im 1. Stockwerk. Das Gebäude verfügt über keinen Aufzug.

Im nicht-öffentlichen Bereich des Gebäudes befinden sich sich die Wirbeltier-, Spinnen- und Insektensammlung sowie die Geologisch-Paläontologische Sammlung.
 
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